產(chǎn)品中心
Product Center
熱門搜索：
轉(zhuǎn)染試劑（Lipo3000）
Sybr Gold核酸染料
M1050-10mlMBP標(biāo)簽親和填料 （麥芽糖結(jié)合蛋白）
500bp DNA Marker
P1025預(yù)染蛋白Marker(10-250KD）
P10310預(yù)染蛋白Marker 10-310KD
M1050-100mlMBP標(biāo)簽親和填料 （麥芽糖結(jié)合蛋白）
Ni NTA Beads 6FF(鎳填料)
(N30210-1L)Ni NTA Beads 6FF(鎳填料)
金擔(dān)子素A
M0500-500ml膜再生液
50bp DNA marker
Y0003-250g(50g/L)YPDPlus培養(yǎng)基
1kb Plus DNA Marker
RNase Free 水（無(wú)菌）
GST填料
當(dāng)前位置：首頁(yè)
產(chǎn)品中心分子生物學(xué)試劑反轉(zhuǎn)錄相關(guān)M-MLV GIII 反轉(zhuǎn)錄酶(三代）
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
product
產(chǎn)品分類| 品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | M5124 |
|---|---|---|---|
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
貨號(hào)：M5124
儲(chǔ)存條件：-20℃
產(chǎn)品組成
組分規(guī)格 | 規(guī)格 |
M-MLVGIII Reverse Transcriptase(200U/ul) | 50ul |
5×M-MLV First Strand Buffer | 500ul |
0.1M DTT | 100ul |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
M-MLV GIII Reverse Transcriptase是通過(guò)基因修飾和重組技術(shù)獲得的第三代M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶。該酶相對(duì)于野生型M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶去除了RNase H活性，并大幅提高了熱穩(wěn)定性（the best 反應(yīng)溫度為50℃），從而大大提高了合成first鏈cDNA時(shí)的特異性和長(zhǎng)度（最長(zhǎng)可達(dá)12 kb），增強(qiáng)了對(duì)RNA復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的耐受性。
酶活單位定義
37℃條件下，以Poly(A)-Oligo(dT)為模板/引物，在10 min內(nèi)， 摻入1 nmol的[3H] dTTP所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位（U）。
質(zhì)量控制
宿主原性DNA檢測(cè)
無(wú)宿主DNA污染
核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)
將酶液與超螺旋質(zhì)粒DNA在37℃溫育4h，通過(guò)DNA電泳檢測(cè)質(zhì)粒無(wú)變化。
核酸外切酶殘留檢測(cè)
將酶液與雙鏈DNA底物在37℃溫育16h，通過(guò)DNA電泳檢測(cè)雙鏈DNA底物無(wú)變化。
使用方法
質(zhì)粒載體線性化與去磷酸化同步反應(yīng)流程
1. 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
試劑 | 使用量 |
引物 | X ul |
Oligo(dT)20 | 終濃度2.5uM |
或隨機(jī)引物 | 終濃度2.5ng/ul |
或基因特異性引物 | 終濃度0.25uM |
模板 RNAa | 50 ng~1ug/20ul |
5× M-MLV First Strand Buffer | 4ul |
0.1 M DTT | 1ul |
M-MLV GIII Reverse Transcriptase (200 U/ul) | 1ul |
dNTP Mix (10 mM Each) | 1ul |
（可選）RNase Inhibitor (40 U/ul) | 1ul |
Nuclease-Free Water | To 20ul |
2. 輕柔吸打混勻后，瞬離；a. 推薦使用試劑盒提取的已去除基因組DNA污染的高質(zhì)量RNA作為模板。
3. 若使用Oligo(dT)20或基因特異性引物，50℃溫育30 min；若使用隨機(jī)引物，先25℃溫育5 min，之后50℃溫育30 min；
注：若目的cDNA小于3 kb，溫育時(shí)間可縮短為15 min。
4. 反應(yīng)結(jié)束后，85℃溫育5 min 以終止反應(yīng)；
5. 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注：cDNA 溶液置于 -20℃可保存半年；置于 -80℃可長(zhǎng)期儲(chǔ)存
010-60608020
上一個(gè)：
返回列表